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    Recombinant TEV Protease (His-tag)

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    貨號:
    S0921K127
    產品規格:
    5000 U
    購買數量:
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    產品詳情 操作說明 注意事項

    產品簡介

    本產品Recombinant TEV Protease是在大腸桿菌中重組表達帶His標簽(His-tag)的煙草蝕紋病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶。TEV Protease是一種常用的半胱氨酸蛋白酶,能特異性地識別七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser(E-N-L-Y-F-Q-G/S),并在Gln(Q)和Gly/Ser(G/S)氨基酸殘基之間進行酶切。Recombinant TEV Protease最適酶切溫度為30℃,在29-34℃范圍均有較高的酶活性,但當溫度達到或高于37℃時,其酶活性會急劇下降。在實際操作過程中,為盡量保留目的蛋白結構和生物活性,建議在4℃用TEV Protease酶切過夜。Recombinant TEV Protease在pH 6.0-9.0范圍內具有活性,而當pH小于或等于5時,會失去酶活性。TEV Protease在400 mM咪唑中仍有較高活力,因此對于使用鎳柱純化含有His標簽目的蛋白,可直接將TEV Protease加入含高濃度咪唑的純化的目的蛋白溶液中,在4℃透析去除咪唑同時進行酶切,也可以在透析后再用TEV Protease進行酶切以去除His標簽。經過酶切后目的蛋白溶液中帶有His標簽的TEV Protease以及切除的His標簽,都可以通過與鎳柱結合而去除。

    應用:常用于去除融合蛋白中MBP、GST、His或其他標簽蛋白。Recombinant TEV Protease本身帶有His標簽可以與鎳柱結合。

    來源:煙草蝕紋病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶,大腸桿菌重組表達,含His標簽。

    酶活定義:在30℃,pH 8.0條件下,1 h內可以將3 μg底物(含有Recombinant TEV Protease酶切位點的蛋白)切割85%以上所需酶量為一個酶活單位。

    失活或抑制:常見的絲氨酸蛋白酶抑制劑如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin等和EDTA不會抑制TEV Protease活性。而靶向半胱氨酸殘基的蛋白酶抑制劑如NEM或IAA等,可以顯著抑制TEV Protease的酶活力。在較高濃度咪唑中TEV Protease仍保持較高酶活性。

    純度及濃度:SDS-PAGE檢測純度≥95%,10 U/μL。

    Recombinant TEV protease儲存液:50 mM Tris-HCl,250 mM NaCl,1 mM EDTA,5 mM DTT,50% (v/v) Glycerol,pH 8.0。

    10×TEV Buffer:500 mM Tris-HCl,500 mM NaCl,5 mM EDTA,10 mM DTT,pH 8.0。


    儲存與運輸

    冰袋(wet ice)運輸;-20℃保存,有效期12個月。


    操作步驟

    1. 蛋白酶切體系推薦:

    Component

    Volume

    10×TEV Buffer

    5 μL

    目的蛋白

    30 μg

    Recombinant TEV Protease (His-tag) (10 U/μL)

    1 μL

    ddH2O

    To 50 μL

    2. 將上述反應體系置于30℃反應1-4 h。如果目的蛋白在30℃穩定性不佳,可考慮將反應體系置于4℃過夜酶切(約16 h左右);

    3. 取酶切產物10 μL樣品進行SDS-PAGE電泳檢測,可以評估酶切用量和反應條件。


    注意事項

    1. 酶制品使用時應放在冰盒內或冰浴,使用完畢后應立即放置于-20℃保存,建議分裝保存;

    2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


    酶切應用實例


    圖片1.png

     


    圖1:Recombinant TEV Protease酶切對照底物蛋白(A+B融合蛋白,其中含有Recombinant TEV Protease酶切位點)效果圖(酶切條件30℃、pH 8.0,分別酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h,依次對應泳道Lane:1-6,酶切體系中加入底物與酶質量比為20:1)。

     

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