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    NCI-H660 人神經內分泌前列腺癌細胞

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    貨號:
    tings-1618248
    產品規格:
    1*10?6
    購買數量:
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    產品詳情 操作說明 注意事項

    細胞介紹

    該細胞來源于63歲成年高加索地區男性的前列腺癌細胞在淋巴結的轉移灶。

    細胞特性

    1) 來源:前列腺癌,淋巴結轉移

    2) 形態:上皮細胞樣,懸浮生長,少量貼附。

    3) 含量:>1x106 個/mL

    4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

    5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

    運輸和保存

    可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

    (1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;

    (2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

    (3)收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。

    細胞用途:僅供科研使用。

    細胞接收后的處理:

    1) 收到細胞后,請檢查發貨培養瓶的狀況,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

    2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時,最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

    3) 觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

    4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象,如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。

    5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基)。

    6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議1:2傳代 。 

    細胞培養步驟

    一.培養基及培養凍存條件準備:

    1) 準備RPMI-1640培養基;優質胎牛血清,5%;添加0.005 mg/ml 胰島素,0.01 mg/ml 轉鐵蛋白,30nM 亞硒酸鈉,10 nM 氫化可的松,10 nM beta-雌二醇 ,2mM L-谷氨酰胺;雙抗,1%。

    2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

    3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

    二. 細胞處理:

    1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養,補加培養基至6ml。

    2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%,即可進行傳代培養。

    1. 將細胞懸液按1:2到1:5比例分到新皿中或者瓶中,補加培養基至6ml,放入培養箱繼續培養。

    3)細胞培養:隨著細胞數量的增加添加培養基來維持細胞的生長,輕搖培養瓶可使附著細胞重新懸浮。單個細胞容易死亡,成團(成簇)細胞更容易生長,當細胞生長過程中出現數量很多懸浮的細胞(團)時 要進行傳代。

    4)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。

    下面T25瓶為例;

    1,細胞凍存時,取上清,可使用血球計數板計數。

    2,4min ,1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。

    3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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