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    Bradford 法蛋白定量檢測試劑盒

    價格: 在線咨詢
    貨號:
    S0921K44
    產品規格:
    250ml
    購買數量:
    在線咨詢 400-1016-218
    產品詳情 操作說明 注意事項

    產品簡介

    目前最常用的蛋白濃度定量檢測方法有兩種,即Bradford法和BCA法。Bradford法原理是基于考馬斯亮藍G250能與蛋白質快速結合??捡R斯亮藍G250在游離狀態下呈紅色,最大光吸收在488 nm,其與蛋白質結合后在595 nm處有最大吸收值,并且光吸收值與蛋白質含量成正比,因此可用于蛋白質的定量檢測。本方法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響,樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1 mM,二硫蘇糖醇的濃度可高達5 mM;但受略高濃度的去垢劑影響,需確保SDS含量低于0.01%,Triton X-100含量低于0.05%,Tween-20,Tween-60,Tween-80等含量低于0.015%。含去垢劑的樣品推薦使用本公司生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒。

    本試劑盒操作簡便快捷,靈敏度高,檢測速度極快,可檢測蛋白濃度范圍為25-1000μg/mL。



    儲存與運輸

    整套試劑可常溫運輸;蛋白標準品(BSA)4℃保存,有效期12個月。配制成蛋白標準溶液后需-20℃保存,并在6個月內使用。


    操作步驟

    1. 配制蛋白標準貯備液:取1 mL蛋白標準配制液加入到蛋白標準品(BSA)管中,將25 mg蛋白標準品完全溶解,即得到濃度為25 mg/mL的蛋白標準貯備液。配制成的蛋白標準溶液可-20℃長期保存。

    2. 配制蛋白標準工作液:取適量25 mg/mL蛋白標準貯備液,用PBS或生理鹽水稀釋50倍,得到終濃度為0.5 mg/mL的蛋白標準工作液。注意稀釋時按照10倍梯度方法稀釋,確保稀釋準確。

    3. 繪制標準曲線(酶標儀法):將蛋白標準工作液分別按0,1,2,4,8,12,16,20 μL加到96孔板中,然后用PBS或生理鹽水依次加20,19,18,16,12,8,4,0 μL將上述梯度工作液補足到20 μL。得到蛋白濃度依次為0,25,50,100,200,300,400,500 μg/mL的梯度曲線。

    4. 準備待測樣品:將待測的蛋白樣品進行適當稀釋(可通過預實驗檢測,使樣品蛋白濃度在標準曲線范圍內,確保檢測結果可信),按照每個樣品20 μL的量加到96孔板中。待測樣品與蛋白標準品用相同溶液稀釋。

    5. 檢測:向以上每孔加入200 μL考馬斯亮藍G250溶液充分混勻(可將96孔板放在振蕩器上振蕩30 s),室溫放置3-5 min后,以標準曲線0號做參比,在595 nm波長下比色測定,記錄各孔吸光度值。

    6. 計算:以標準曲線中梯度蛋白含量(μg/mL)為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪出標準曲線。根據所測樣品的吸光值,在標準曲線上即可查得相應孔中待測樣品的蛋白濃度(μg/mL),再乘以樣品稀釋倍數即為待測樣品實際蛋白濃度。

    另:如用分光光度計測定,則在第3步中將梯度標準品反應體積改為1 mL。向7支潔凈的玻璃試管或比色管中分別加入0,0.05,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL蛋白標準工作液(濃度0.5 mg/mL),然后各管中依次分別加入PBS或生理鹽水1.0,0.95,0.9,0.8,0.6,0.4,0.2,0 mL,將梯度工作液補足至1 mL,每管充分混勻,即得到蛋白濃度依次為0,25,50,100,200,300,400,500 μg/mL的梯度曲線。

    待測蛋白樣品做適當稀釋后,加入到新的玻璃試管或比色管中,樣品量為1 mL。

    向上述標準曲線梯度管及樣品管中各加入考馬斯亮藍G250溶液3 mL,充分混勻,室溫靜置3-5 min后用分光光度計進行比色檢測。

    檢測時分光光度計波長設置595 nm,以標準曲線0號管為參比調零,檢測標準曲線及待測樣品。按照步驟6中的方法繪制標準曲線及計算待測樣品中的蛋白濃度。


    注意事項

    1. 考馬斯亮藍G250溶液使用前需恢復至室溫,并顛倒混勻,以免影響檢測的靈敏度。

    2. 在進行蛋白標準貯備液的配制時,需確保溶解充分。稀釋配制蛋白標準工作液時建議10倍梯度稀釋,不要一次稀釋50倍,以免產生較大誤差。

    3. 操作時請穿實驗服,并佩戴一次性手套。


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