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    人外周血淋巴細胞分離液

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    貨號:
    FKU0149
    產品規格:
    100ml
    購買數量:
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    產品詳情 操作說明 注意事項

    產品描述

    本產品是一種適用于人外周血淋巴細胞分離的梯度密度分離液,也適用于大多數哺乳動物單個核細胞分離,其原理主要是根據外周血不同細胞之間的密度差異(紅細胞和粒細胞密度大約為1.090 g/mL;血小板密度1.030-1.035 g/mL;淋巴細胞和單核細胞密度1.075-1.090 g/mL),通過梯度密度離心,將淋巴細胞從外周血中分離出來。本產品為無菌、低內毒素水平的即用型分離液,其密度為1.077±0.001 g/mL(20℃)。本產品在傳統Ficoll-泛影葡胺基礎上進行了優化,使其在血液樣本加入后較長時間內維持分離液的穩定性,使用操作簡單且分離的淋巴細胞純度高、狀態好。


    儲存與運輸

    冰袋(wet ice)運輸;2-8℃避光保存,有效期12個月。


    操作步驟

    以分離1 mL人外周血中的淋巴細胞為例,血液和淋巴細胞分離液體積比為1:1-1:2,在此范圍內適當調整;選擇離心管時需注意,血液和淋巴細胞分離液總體積不超過離心管容積的三分之二。

    1. 取新鮮抗凝全血(肝素、EDTA、枸櫞酸鈉等抗凝劑皆可)1 mL,加入等體積PBS或者無鈣鎂Hanks緩沖液稀釋,即得到2 mL稀釋的全血;

    2. 吸取人外周血淋巴細胞分離液3 mL加入到15 mL無菌離心管中;

    3. 將離心管傾斜45°,將2 mL稀釋后的血液沿管壁緩慢加入離心管中,使血液平鋪在人外周血淋巴細胞分離液上層;

    4. 建議使用水平轉頭離心機離心,將離心管置于水平轉頭適配器中,降低離心機加減速(3-5檔為宜),室溫條件下800 g離心25 min;

    5. 離心后,輕拿離心管置于管架上,可觀察到明顯的分層現象:最上層是血漿層;中上白膜層是淋巴細胞層;中下層為淋巴細胞分離液層;最下層為紅細胞和粒細胞層(參考附圖);

    6. 吸除最上層血漿層,小心吸取白膜層(淋巴細胞層)到新的無菌離心管;

    7. 用8 mL PBS或其他緩沖液洗滌后,100 g離心10 min,棄上清;

    8. 重復步驟7(可選)

    9. 根據實驗目的用所需培養基或緩沖液重懸淋巴細胞。



    注意事項

    1. 本產品在使用前需室溫充分平衡并顛倒混勻,分離時溫度以18-25℃為宜。

    2. 為保持淋巴細胞的活性,血液最好選取采血2 h以內的新鮮抗凝血液;如需對分離的淋巴細胞進行進一步的培養和檢測,請在采血和分離過程中注意無菌操作。

    3. 稀釋或洗滌緩沖液,不可使用含鈣、鎂離子的緩沖液,以免導致血細胞凝聚。

    4. 過多吸取淋巴細胞白膜層以外的成分,會導致交界處的一些粒細胞或血小板等被混入。

    5. 由于不同血液樣本間的差異,可能對分離效果產生影響??筛鶕嶋H情況適當調整離心力和時間,參考離心力和時間范圍為:500-1000 g、20-30 min。

    6. 將血液和淋巴細胞分離液混合一定時間后,出現紅細胞沉降屬于正?,F象。

    7. 為了您的健康和安全,操作時請穿好實驗服、戴好手套。



    附圖:分離前后,各層示意圖


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    本產品僅供科研用途,不用于臨床診斷!

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