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    PEI 40K Transfection Reagent

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    貨號:
    FKU0115
    產品規格:
    10ml
    購買數量:
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    產品詳情 操作說明 注意事項

    產品簡介

    PEI 40K Transfection Reagent(線性化聚乙烯亞胺轉染試劑),是一種以線性化聚乙烯亞胺為主體、分子量為40000的高電荷陽離子聚合物,其本身帶正電,可以有效的結合帶負電的核酸,與之形成復合物,并導入到細胞中,適用于細胞的質粒DNA轉染。PEI 40K(線性化聚乙烯亞胺)轉染試劑細胞毒性低,轉染效率高且成本低,相較于脂質體類轉染試劑,性價比極高。目前已經驗證線性PEI 40K轉染試劑廣泛適用于多種細胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela細胞等,轉染效率高達80%~90%。本產品主要成分PEI 40K濃度為1 mg/mL。



    儲存與運輸

    冰袋(wet ice)運輸;4℃保存,有效期至少6個月;長期不用可-20℃保存更長時間,避免反復凍融。


    組成

    Component

    G1802-1ML

    G1802-10ML

    PEI 40 K Transfection Reagent

    1 mL

    10×1 mL

    產品說明書

    1份


    操作步驟

    1. 貼壁細胞轉染前準備工作(6孔板為例,其他規格參考附表):

    a) 轉染前一天,將細胞以合適的密度均勻種植于孔板中,以正式轉染時細胞匯聚至70-85%為宜;

    b) 轉染前,去除原細胞培養基,用PBS清洗1-2次后,更換1.8 mL不含血清或者低血清(5%以下)的基礎培養基,或Opti-MEM;不同細胞對于血清依賴性不同,根據具體細胞種類調整。

    c) 將換好液的細胞放置于培養箱中,并開始配制轉染復合物。

    2. 懸浮細胞轉染前準備工作:

    a) 轉染當天,將適量的細胞,離心去除培養基后,用不含血清或者低血清(5%以下)的基礎培養基重懸;

    b) 將準備好的懸浮細胞放置到培養箱中,并開始配制轉染復合物,轉染復合物和培養基之間的體積比,可以參考貼壁細胞的比值,進行適當調整。

    3. 轉染復合物準備:

    a) 配制A液:100 μL不含血清的基礎培養基與2 μg質粒DNA,吹吸混勻;

    b) 配制B液:100 μL不含血清的基礎培養基與6-8 μL PEI 40 K Transfection Reagent,吹吸混均;

    c) 將B液加到A液中,輕輕吹打混均,室溫孵育15 min,使其形成DNA-PEI轉染復合物。

    4. 轉染細胞:

    a) 將上一步得到的轉染復合物,以畫十字或者環繞的方式,滴加到之前換好液的孔板中;

    b) 手持孔板在平面上畫“8”字或其他的方式輕搖培養板,使其混合充分,置于37℃,5% CO2培養箱中孵育;

    c) DNA-PEI轉染復合物與細胞共同孵育4-6 h即有較好的轉染效率,適當延長或過夜孵育,轉染效率更佳。


    注意事項

    1. 請使用狀態良好的健康細胞,復蘇的細胞建議至少傳代2次后再進行轉染。

    2. 請使用高質量、無內毒素的質粒DNA。

    3. 轉染時高濃度血清以及抗生素的使用,可能會影響細胞狀態以及轉染效率。

    4. 不同的細胞耐受性、敏感性不一樣,轉染孵育時間長短,以及PEI/DNA使用比例,可視情況酌情調整。

    5. 操作時請穿實驗服,佩戴一次性手套。


    附表:不同細胞培養容器轉染使用量(僅供參考)

    培養器皿

    生長面積

    cm2

    接種細胞數

    DNA量

    (μg)

    PEI

    (μL)

    轉染復合物體積

    (μL)

    總體積

    mL)

    96孔板

    0.3

    (2-4)×104

    0.1

    0.3-0.4

    10

    0.1

    24孔板

    1.9

    (1.2-2.4)×105

    0.5-1

    1.5-4

    50

    0.5

    12孔板

    3.8

    (2.4-4.8)×105

    1-2

    3-8

    100

    1

    6孔板

    9.5

    (6-10)×105

    2-4

    6-16

    200

    2

    10 cm培養皿

    55

    (4-6)×106

    12-24

    36-96

    1000

    12

    T75培養瓶

    75

    (6-10)×106

    18-36

    54-144

    1000

    15

    本產品僅供科研用途,不用于臨床診斷!

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