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    原代細胞培養過程中的常見問題

    來源:萬物生物   發布時間:2020-08-21

    原代細胞與細胞系有什么區別?

      根據傳統定義,自組織第一次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞直接從組織分離,生命周期有限,經數次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內需掌握好細胞的最大生長空間,以保持細胞群中基因型和表型的一致性。

      細胞系是不斷生長、分化的細胞群,因其經過遺傳改造,致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫療或科研。

      倍增和代數有什么區別?

      倍增是培養物中細胞總數的翻倍,通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養瓶中移出,傳代培養過程的次數,傳代培養的目的,是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

      接收到的凍存細胞該如何處理?

      收到包裝箱后,立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快,以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃,這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

      凍存的細胞該如何開始培養?

      (1) 將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。

      (2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉,直到管內物體完全融化。

      (3) 將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉入無菌環境。

      (4) 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。

      (5) 打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開蓋時可能會有少量溢出,這是正?,F象)。

      (6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。

      (7) 蓋好培養瓶的蓋子,輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。

      (8) 將培養瓶放入培養箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)

      (9) 放入培養箱后第6-16小時更換一次培養基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。

      細胞培養過程中,多久更換一次培養基?

      這取決于細胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養基,許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

      注意:凍存細胞復蘇后,在6-16小時內更換培養基,以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞。

      可以擴增培養和再次凍存原代正常人類細胞嗎?

      這取決于細胞的類型。一些細胞類型像神經細胞,神經膠質細胞和一些生長緩慢的上皮細胞,不推薦擴增培養和再次凍存。其它的細胞類型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質細胞等等,可以擴增培養和再次凍存。

      然而,需要注意的是再次凍存的過程可能導致細胞生長性能的改變。

      培養瓶中應該加入多少體積的培養基?

      我們推薦的用量為:T-25培養瓶5ml,T-75培養瓶15ml,T-150培養瓶30ml。

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