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    原代細胞的培養方法

    來源:萬物生物   發布時間:2020-10-09

    原代細胞最接近和最能反映體內生長特性,適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。

      原代細胞的培養,也叫初代培養,是從供體取得組織細胞在體外進行的首次培養,是建立細胞系的第一步,是一項基本技術。

      原代細胞的培養方法一般有以下4種:

     ?、?組織塊培養法

      組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

     ?、?消化培養法

     ?、?懸浮細胞培養法

      對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

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      器官培養是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養,器官培養可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響,以及局部環境的生物調節作用。

      原代細胞的培養條件:

      一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養

      1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;

      2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;

      3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養;

      4、 胎牛血清濃度為10%-80%;

      5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養;

      6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發生脫落,漂??;

      7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;

      8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。

      二、懸浮細胞培養

      1、原代培養時要盡量去除紅細胞;

      2、短期培養,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行;

      3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;

      4、長期培養時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;

      5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;

      6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。

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