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    裸鼠成瘤實驗

    來源:萬物生物   發布時間:2021-11-02

    裸鼠成瘤實驗

    一、移植性腫瘤動物模型
    目前臨床所用的抗腫瘤藥中,大多數是經動物移植性腫瘤試驗篩選而發現的。應用動物移植性腫瘤篩選藥物的優點是:使一群動物同時接種同樣量的瘤細胞,生長速率比較一致,個體差異較小,接種成活率近100%,對宿主的影響相類似,易于客觀判斷療效,可在同種或同品系動物中連續移植,長期保留供試驗用,試驗周期一般均較短,試驗條件易于控制等。因此目前抗腫瘤藥篩選大多數采用動物移植瘤作為篩選模型。目前世界上保存的動物移植腫瘤約有400株,但篩選試驗常用者僅20~30種。據1984年統計,我國在同系、同種動物中已建立各種動物和人的常見的瘤株64個。例如小鼠肺腺瘤(HP615)、小鼠子宮頸瘤27號(U27)、小鼠腦瘤22(B22)、小鼠淋巴細胞性血?。↙615)、裸鼠人肝瘤移植瘤和人腦惡性膠質細胞瘤(NCS—1)等。
    動物腫瘤可通過移植傳代而培養出所需要的腫瘤細胞株。瘤株是一種組織學類型和生長特性已趨穩定,并能在同系或同種動物中連續傳代的腫瘤細胞模型。腫瘤移植于健康動物,相當于活體組織培養,可長期保存瘤種,供實驗所用。
    實驗中常用腹水瘤和實體瘤兩種方式進行移植。對于會產生腹水的腫瘤,可將其一定數量的細胞注入受體動物腹腔形成腹水瘤或產生腹水。實體瘤移植也是在無菌條件下,把實體瘤切成2~3mm小塊,植于受體動物皮下。
    二、誘發性腫瘤動物模型
    1.肝癌 二乙基亞硝胺(DEN)誘發大白鼠肝癌:取體重250g左右的封閉群大白鼠,雌雄不拘。按性別分籠飼養。除給普通食物外,飼以致癌物,即用0.25轓水溶液灌胃,劑量為10mg/kg,每周一次,其余5天用0.025轓水溶液放入水瓶中,任其自由飲用。共約4個月可誘發成肝癌?;騿斡?.005%摻入飲水中口吸服8個月誘發肝癌。4-2甲基氨基氮苯(DBA)誘發大鼠肝癌:用含0.06跘的飼料喂養大鼠,飼料中維生素B2不應超過1.5~2mg/kg,4~6月就有大量的肝癌誘發成功。2-乙酰氨基酸(2AAF)誘發小鼠、狗、貓、雞、兔肝癌:給成年大鼠含0.03*AF標準飼料。每日每平均2~3mg2AAF(也可將2AAF混于油中灌喂),3~4月后有80~90%動物產生肝腫瘤。二乙基亞硝胺誘發大鼠肝癌:用劑量為每日0.3~14mg/kg體重,混于飼料或飲水中給予,6~9個月后255/300大鼠發生了肝癌。亞胺基偶氮甲苯(OAAT)誘發小鼠肝癌:用1%OAAF苯溶液(約0.1ml含1mg)涂在動物的兩肩胛間皮膚上,隔日一次,每次2~3滴,一般涂100次。實驗后7~8周即而出現第一個肝腫瘤,7個月以上可誘發小鼠肝腫瘤約55%?;蛴?.5mgOAAT溶于葵瓜子油中,給C3H小鼠皮下注射4次,每日間隔10天,也可誘發成肝癌。黃曲霉素誘發大鼠肝癌:每日飼料中含0.001~0.015ppm,混入飼料中喂6個月后,肝癌誘發率達80%。
    2.胃癌 甲基膽蒽誘發小鼠胃癌:取20g左右的小鼠,無菌手術下,在腺胃粘膜面穿掛含甲基膽蒽(MC)線結。含MC的線結是用普通細線,在一端打結后,將線結置于盛 有MC小玻璃試管內,在酒精燈上微微加溫,使MC液化滲入線結。MC濃度為0.05~0.1g20-甲基膽蒽內浸入10~20根線。手術埋線后4~8個月可誘發成功胃癌。用不對稱亞硝胺,劑量為0.25ml/kg體重,3個月后全部動物發生前胃乳頭狀癌,7~8個月后有85~100%發生前胃癌。昆明種最敏感。A系次之,615系小鼠敏感性最差。此外還可用甲基亞硝基醋酸尿素給BD大鼠飲水中加2mg/kg體重,每周5次飲用,520天后全部大鼠均發生了腺胃癌。
    3.食管癌 甲基芐基亞硝胺(MBNA)誘發大鼠食管癌:取體重100g以上的Wistar大鼠,任其食用含甲基芐基亞硝胺的飲水,并將MBNA摻入飼料中使每日攝入量達0.75~1.5mg/kg體重。80~100天可誘發成食管癌。也可用二烴黃樟素(Dihydrosafrole),它是一種制備啤酒的調味品,在大鼠飼料中加入百萬分之二千五百至一萬(2500~10000ppm)黃樟素,就能引起20~75%的食管癌。用0.2%或0.005%的甲基芐基亞硝胺水溶液,給動物經口灌喂,每天一次,大鼠灌注劑量1mg/kg體重,至第27天即發現一例食管乳頭狀瘤,154天發現第一例食管癌,11個月食管癌的發生率為53%。
    4.肺癌 二乙基亞硝胺(DEN)誘發小鼠肺癌:小白鼠每周皮下注射1轓水溶液一次,每次劑量56mg/kg,DEN總劑量達到868mg,觀察時間為100天左右時,發癌率可達40%。而DEN總劑量達到1176mg,觀察時間為半年左右時;發癌率可達94%。烏拉坦誘發肺腺癌:小鼠(A系,1~11/2月齡)較大鼠敏感,每次每只腹腔注入10%烏拉坦生理鹽水液0.1~0.3ml,間隔3~5日再注,共注2~3個月,每只小鼠用量約為100mg,注后3個月肺腺癌發生率為100%,而且多數為多發性,這種誘發瘤為良性。此外還可用氣管內注入苯并芘、硫酸銨氣溶膠、甲基膽蒽等誘發肺癌。如猴氣管內注入3,4苯并芘(苯并花為3~15mg與等量之Fe2O3混合液),每周一次,共10次,6只猴中有2只誘發肺的鱗狀上皮癌。亦有人用硫酸胺氣溶劑給100只大鼠吸入,13個月后所有大鼠都發生了肺腺癌。用0.2%明膠作懸浮劑將甲基膽蒽混合后給金地鼠氣管內注入,每次0.1ml(含甲基膽蒽5mg)每周一次,共6次,53周后有62.5%動物發生了肺癌。
    5.鼻咽癌 二甲基膽蒽(MC)誘發大鼠鼻咽癌:取直徑2~3mm的硬質塑米管,在酒精燈上小火拉成錐形,每段長約3.5cm,管內填以結晶體MC。小管一端用火封閉,以防藥物外溢,尖端用針刺數孔,使MC能從小妃溢出。取體重120g左右的大白鼠,雌雄均可,乙醚麻醉后,由前鼻孔將上述含MC的塑料小管插入鼻腔,利用前鼻孔較小管粗端為小的特點,稍加用力,迫使小管全部進入鼻腔內,其尖部可達鼻咽腔。不需另加固定,即可使小管長期留于鼻腔內。待到預定時間(半年以上),或動物自行死亡時,到其鼻咽部,10%福爾馬林固定,脫鈣后,石蠟包埋,進行連續切片。發癌率可達60%以上。二乙基亞硝胺滴鼻法誘發鼻咽癌:取120g左右大白鼠,雌雄均可,乙醚麻醉后,用磨平針尖的8號針頭,從前鼻孔輕輕插入,針尖可達鼻咽腔。經注射器灌注用1%吐溫-80新配的33.3轓混懸液0.02ml(含DEN6.7mg)每周1次,共15~20次,可誘發成鼻咽癌。
    6.宮頸癌 取雌性小白鼠,以附有0.1mgMC的棉紗線結在動物不麻醉的狀態下,借助于陰道擴張器及磨純的彎針,將線穿入宮頸。經右宮角背部穿出,使線結固定于宮頸口。線的另一端則固定于背部肌肉,縫合皮膚,掛線以后,同日開始連續注射青霉素2~3天。以防術后感染。至一定時間(半年左右)處死動物,宮頸組織用10%福爾馬林固定,石蠟包埋,連續切片。

    7.結腸癌 給四周齡的雄性大白鼠,皮下注射二甲基芐肼(Dimethlhydrazine,DMH)每周一次,連續21周,每次DMH21mg/kg。最后一次給藥后1~4周,處死動物。降結腸部位用Bouin液固定,脫水,石蠟包埋,切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液,并加EDTA37mg,用氫氧化納(0.1N)液將pH調至6.5備用。




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